非無菌產品微生物限度檢查

檢測依據：2020年版《中國藥典》四部 通則 1106

用于能在有氧條件下生長的嗜溫細菌和真菌的計數。

• 用于檢查非無菌制劑及無菌制劑及其原、輔料的等是否符合規定的微生物限度標準

• 除另有規定外，本法不適用于活菌制劑的檢查。

供試品微生物計數所使用的的培養基應進行適用性檢查；

供試品的微生物計數方法應進行方法適用性試驗，包括需氧菌總數計數、霉菌和酵母菌總數計數，以確認所采用的方法適合于該產品的微生物的微生物計數。

試驗菌種：

l 金黃色葡萄球菌 [Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]

l 銅綠假單胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]

l 枯草芽孢桿菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]

l 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]

l 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]

按表1規定，接種不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液體培養基（TSB）管或胰酪大豆胨瓊脂培養基平板（TSA）或沙氏葡萄糖瓊脂平板（SDA），置表1規定條件下培養。每一試驗菌株平行制備2管或2個平板。同時，用相應的對照培養基替代被檢培

養基進行上述試驗。

被檢固體培養基上的菌落平均數與對照培養基上的菌落平均數的比值應在0.5~2范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基的菌落一致；被檢液體培養基管與對照培養基管比較，試驗菌應生長良好。

陰性對照 應無菌生長，如有菌生長，應進行偏差調查。

計數方法適用性檢查

1、供試液制備

根據供試品的理化特性與生物學特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應均勻加熱，且溫度不應超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養基，不得超過1小時。

水溶性供試品

• 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養基，溶解或稀釋制成1：10供試液。

• 若需要，調節pH值至6~8。

• 必要時用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的的供試品原液作為供試液。

常見供試品制備方法

水不溶性非油脂類供試品

油脂類供試品

膜劑類供試品

腸溶及結腸溶制劑供試品

氣霧劑供試品

貼劑、貼膏劑供試品

• 如果經確認均不適用，應建立其他適宜的方法。

2、接種和稀釋

• 按表2規定及下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。

• 所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。

• 為確認供試品中的微生物能被充分檢查，首先應選擇至低稀釋級的供試液進行計

數方法適用性檢查。

試驗組：取制備好的供試液，加入試驗菌液，混勻，是1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。

供試品對照組： 取制備好的供試液，以稀釋液代替菌液同試驗組操作

菌液對照組 ：取不含中和劑及滅活劑的相應稀釋液替代供試液，按試驗組操作加入試驗菌液并進行微生物回收試驗。

如果供試品對微生物生長的抑制無法以其他方法消除，供試液可經過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入試驗菌懸液進行方法適用性試驗。

3、抗菌活性的去除或滅活

若試驗組菌落數-供試品對照組菌落數＜菌液對照組菌落數值的50%，可采用下述方法

• 增加稀釋液或培養基體積

• 加入適宜的中和劑或滅活劑

• 采用薄膜過濾法

• 上述幾種方法的聯合使用

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